結核分枝桿菌融合蛋白Mtb10.4-Hsp16.3的構建.表達和純化方法及其應用 ...

本發(fā)明選擇結核桿菌生長(cháng)期和休眠期主要的保護性抗原Mtb10.4和Hsp16.3，構建融合蛋白Mtb10.4-Hsp16.3（MH）。在大腸桿菌中表達純化該蛋白，將該蛋白和佐劑混合構建亞單位疫苗，分別于BCG初免后12、14周加強免疫C57BL/6小鼠兩次，最后一次免疫6周后檢測細胞免疫反應，最后一次免疫后10周進(jìn)行結核菌毒株H37Rv攻擊。結果：該融合蛋白能在大腸桿菌中穩定大量表達，經(jīng)離子交換層析、凝膠過(guò)濾層析和疏水層析三步純化得到純度較高的蛋白；構建的亞單位疫苗免疫動(dòng)物可產(chǎn)生針對結核桿菌特定抗原（Mtb10.4和Hsp16.3）的特異性細胞和體液免疫應答，具有較強的免疫原性；毒株攻擊后，小鼠肺臟結核菌數量明顯少于PBS組和BCG組。結論：本發(fā)明成功構建、表達和純化不帶任何標簽的融合蛋白MH,此蛋白可誘導較強的細胞和體液免疫應答并具有一定的動(dòng)物保護效應，有望成為臨床結核病預防和治療的候選疫苗。

技術(shù)負責人：祝秉東  基礎醫學(xué)院