TrkA基因作為綿羊產(chǎn)羔數性狀的分子標記及其應用

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于綿羊分子標記篩選技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及TrkA基因作為綿羊產(chǎn)羔性狀的分子標記及其應用。本發(fā)明的分子標記克隆自綿羊TrkA基因。

背景技術(shù)

傳統育種方法中，對家畜性狀選擇的方法多依賴(lài)于家畜的表型，這種方法在大家畜選育中需要豐富的經(jīng)驗和長(cháng)達幾十年時(shí)間。對于一些由微效多基因控制的低遺傳力的數量性狀，例如綿羊產(chǎn)羔性狀，不僅由母羊自身遺傳因素決定，且受到不同環(huán)境和飼養條件的影響，常規育種方法遺傳改良進(jìn)展緩慢。形態(tài)學(xué)標記、細胞學(xué)標記、生物化學(xué)標記以及免疫學(xué)標記雖然已經(jīng)在優(yōu)良種畜選育中進(jìn)行應用，但由于這些標記的多態(tài)性低和信息量小，且是對基因的間接反映，受到基因與環(huán)境互作的影響比較大，在生產(chǎn)實(shí)踐中有很大的局限性。隨著(zhù)分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，尤其是分子遺傳標記技術(shù)的發(fā)展和完善，利用與目標性狀緊密連鎖的分子遺傳標記，對目標性狀進(jìn)行跟蹤性選擇，減少育種過(guò)程中選擇的盲目性，并可以進(jìn)行早期選育，極大提高育種效率。

TrkA(Tyrosine Kinase A)是由原癌基因trk編碼的酪氨酸蛋白激酶受體，神經(jīng)生長(cháng)因子(NGF)以二聚體的形式與其相結合，誘導TrkA酪氨酸殘基處磷酸化，通過(guò)激活磷脂酶Cγ(PLCγ)→磷脂酶肌醇激酶(PI3K)→銜接蛋白(Shc)信號通路將胞外信號傳遞到細胞核(馬永和，2010)。TrkA不僅介導NGF對神經(jīng)系統中膽堿能神經(jīng)元的分化和發(fā)育的調控(CountsS等，2005)，而且在生殖系統也發(fā)揮功能，已經(jīng)發(fā)現在人、鼠、金倉鼠、綿羊和山羊等動(dòng)物卵泡均有TrkA基因表達(馬永和等，2010)。不同發(fā)育階段卵泡中TrkA表達豐度不同，豬的原始卵泡和初級卵泡的卵泡細胞和卵母細胞不表達TrkA，但在二級卵泡和三級卵泡的卵泡細胞及卵母細胞中有大量表達(Levanti MB等，2005)。NGF與TrkA參與早期卵泡的裝配、顆粒細胞的增殖、卵母細胞的成熟及排卵等過(guò)程(Dissen GA等，2001)。在體外，NGF還可以促進(jìn)牛腔前卵泡的發(fā)育(李海等，2005)和豬卵母細胞成熟(陸晨等，2013)。NGF-TrkA復合物對輸卵管和子宮發(fā)育亦發(fā)揮重要作用，TrkA在子宮內膜細胞、腺細胞、基質(zhì)細胞、輸卵管黏膜上皮細胞均有表達，且卵泡期，輸卵管中表達量顯著(zhù)高于卵巢(馬永和等，2010)。

現有文獻表明，TrkA基因參與了動(dòng)物繁殖調控過(guò)程，尤其是卵子發(fā)生和卵泡發(fā)育。因此，尋找該基因中變異位點(diǎn)，通過(guò)與產(chǎn)羔性狀間的關(guān)聯(lián)分析，是進(jìn)行分子遺傳標記輔助選擇的基礎。此發(fā)明開(kāi)展了綿羊TrkA基因部分基因組序列克隆和SNP篩查、檢測及與產(chǎn)羔數性狀關(guān)聯(lián)分析，以提高繁殖力母羊選擇的準確性，可望綿羊加快育種進(jìn)程。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于克服現有技術(shù)的缺陷，特別是現有綿羊育種周期長(cháng)、選擇準確性低、無(wú)法進(jìn)行早期選育等技術(shù)缺陷，提供一種提高綿羊產(chǎn)羔數性狀關(guān)聯(lián)的分子標記作為輔助選擇的手段。本發(fā)明的核心在于通過(guò)PCR-RFLP技術(shù)對候選個(gè)體的TrkA基因部分序列進(jìn)行基因型分析，為綿羊產(chǎn)羔數性狀檢測提供一種輔助選擇的遺傳標記。

技術(shù)負責人： 李萬(wàn)宏 草地農業(yè)科技學(xué)院